活动性结核是通过检查呼吸道或其他部位标本中的结核分枝杆菌来诊断的。尽管一些新的诊断方法（如分子生物学方法）得到了一定的发展，但抗酸菌涂片显微镜检查和罗氏培养基的分离培养依然是诊断活动性结核病的“金标准”，特别是在不发达国家和地区是唯一证实临床疑似病例的可行性方法。

抗酸杆菌涂片镜检作为发现传染源、选择化疗方案、考核评价疗效的重要手段，在结核病控制工作中占有不可或缺的位置。为了确定标本中是否含有抗酸菌，将标本直接或浓缩集菌后涂在载玻片上，加热固定后先进行初染，然后用酸性乙醇脱色，为了区别于其他微生物和背景色，再用不同颜色的染料进行复染，在显微镜下观察有无抗酸菌，若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用萋-尼氏（Ziehl-Neelsen）染色和Kinyoun染色法，都是将碱性复红溶于乙醇作为初染液，用酸性乙醇脱色后抗酸菌呈红色，两种方法的区别在于萋-尼氏染色是热的抗酸染色，涂片上滴加复红后要进行加热，Kinyoun染色则是冷染色，不需要加热，我国推荐使用前者。为提高镜检敏感性，减轻工作人员疲劳，也可用金胺O进行荧光染色，在荧光显微镜下抗酸菌呈现金黄色荧光。抗酸杆菌涂片镜检简便易行，准确性较高，痰中查出结核菌，就能确诊患了结核病。但检出阳性率低是其最主要的问题。

涂片检查只能证明抗酸杆菌的存在与否，但欲进一步证实细菌的死活情况、鉴定菌种及进行药物敏感性试验等，则须进行分枝杆菌的培养。分枝杆菌的分离培养主要采用固体罗氏培养基培养法，液体培养基培养法也有应用，其中快速培养仪培养法应用较多。无论采用何种方法分离培养分枝杆菌，待检标本均需先进行前处理。前处理的目的主要有二个，一是去污染（除去分枝杆菌以外的杂菌），二是液化标本。常用的前处理剂主要为4%NaOH（碱处理），也有用4%H ₂SO ₄（酸处理），用0.5%的半胱氨酸氢氧化钠溶液效果更佳。改良罗氏培养基由国际防痨和肺病联合会推荐，是长期以来广泛使用的传统分枝杆菌固体培养基。根据不同的前处理法，选择不同的罗氏培养基。将前处理后的标本或离心沉淀物接种于固体培养基，于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的菌落，特点为黄色的菜花样菌落，表面粗糙。快速培养主要是利用快速培养仪和营养丰富的液体培养基达到快速培养的目的。其标本的前处理方法和接种方法基本一致。目前，常用的快速培养系统主要有:BacT/ALERT 3D、BACTEC460、BACTEC960、ESPⅡ和变色液体培养基等。痰结核菌培养，结果可信度高，但需时6～8周，即使快速培养仪可以大大缩短检测时间，但其成本相对高昂，应用受到限制。

分枝杆菌种类繁多，除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌外，其他的分枝杆菌统称为非结核分枝杆菌。由于不同的分枝杆菌其生物学特性、致病性、免疫学和对药物的敏感性不尽相同，因此菌种鉴定对于后续研究、预防和治疗均具有十分重要的意义。根据分枝杆菌对某些化学试剂的耐受性不同，将待检分枝杆菌制成菌悬液，接种于含某种化学试剂的鉴别培养基上，根据细菌的生长情况即可初步鉴定为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。若需近一步鉴定为何种非结核分枝杆菌，则需进一步进行硝酸还原试验、烟酸试验、吐温-80分解试验和耐热触酶试验等生化反应和其他鉴别试验。

传统的分枝杆菌药物敏感性测定试验（药敏试验）是基于表型耐药检测为基础的，在含有一定浓度药物的培养基中种入一定数量的分枝杆菌，根据细菌的生长与否来判断受试细菌对该药的敏感性。药敏试验方法分为直接法和间接法两大类，常用的方法有:绝对浓度法、比例法、E-test法、快速药敏法和微量快速药敏法，具体操作方法见本书后续章节。

1.Ernst JD.The immunological life cycle of tuberculosis.Nat Rev Immunol，2012，12（8）:581-591

2.O′Garra A，Redford PS，McNab FW，et al.The immune response in tuberculosis.Annu Rev Immunol，2013，31:475-527

3.Wolf AJ，Linas B，Trevejo-Nunez GJ，et al.Mycobacterium tuberculosis infects dendritic cells with high frequency and impairs their function in vivo.J Immunol，2007，179（4）:2509-2519

4.Blomgran R，Desvignes L，Briken V，et al.Mycobacterium tuberculosis inhibits neutrophilapoptosis，leading to delayed activation of naiveCD4Tcells.Cell Host Microbe，2012，11（1）:81-90

5.Montamat-Sicotte DJ，Millington KA，Willcox CR，et al.A mycolic acid-specific CD1-restricted T cell population contributes to acute and memory immune responses in human tuberculosis infection.J Clin Invest，2011，121（6）:2493-2503

6.Murray PR.Manual of clinical microbiology.Washing:ASM Press，2003

7.中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程.北京:中国教育文化出版社，2006

8.赵雁林.细菌学检查在结核病控制中的作用.中华医学会结核病学分会2006年学术会议论文汇编，2006:43-46

9.Davis JL，Cattamanchi A，Cuevas LE，et al.Diagnostic accuracy of same-day microscopy versus standard microscopy for pulmonary tuberculosis:a systematic review and meta-analysis.Lancet Infect Dis，2013，13 （2）:147-154

1.结核分枝杆菌的免疫和超敏反应主要由什么细胞介导？主要机制是什么？

2.结核分枝杆菌的基本检测方法有几种？概述各种方法的优劣。